SwineDx - Biossensor Rápido de Fluxo Lateral baseado em (RT)-RAA para Deteção On-Site de Escherichia coli Enterotoxigénica e Rotavírus na Diarreia Pós-Desmame de Leitões

OBJETIVO PRINCIPAL:

O projeto SwineDx tem como objetivo desenvolver e validar um biossensor portátil, rápido e economicamente acessível para o diagnóstico em campo da diarreia pós-desmame (DPD) em leitões. Esta solução inovadora combinará a tecnologia de amplificação isotérmica mediada por recombinase (RT-RAA) com um ensaio de fluxo lateral (LFA), permitindo a deteção simultânea e específica de Escherichia coli enterotoxigénica (ETEC) e Rotavírus A diretamente a partir de amostras fecais.

O plano de trabalho está estruturado em quatro tarefas:

(1) desenho de primers e otimização das condições de amplificação isotérmica;

(2) montagem do biossensor LFA e validação em ambiente laboratorial controlado;

(3) desenvolvimento de um método rápido e fiável de extração de DNA/RNA adaptado a amostras fecais; (4) validação em campo com amostras fecais reais de leitões, garantindo a precisão do diagnóstico em condições práticas de exploração.

OBJETIVOS, ATIVIDADES E RESULTADOS ESPERADOS:

O projeto SwineDx tem como principal objetivo desenvolver e validar uma solução de diagnóstico Point-of- Need (PoN), portátil, rápida e acessível, capaz de detetar e diferenciar os principais agentes causadores da diarreia pós-desmame (DPD) em leitões: Escherichia coli enterotoxigénica (ETEC) e Rotavírus A.

Especificamente, o projeto pretende:

• Desenvolver protocolos otimizados de amplificação isotérmica (RAA/RT-RAA) para deteção dos genes eltA e estA (ETEC) e vp6 (Rotavírus A).
• Integrar os produtos amplificados num biossensor de fluxo lateral (LFA), permitindo leitura visual simples e rápida.
• Criar um método eficiente e simplificado de extração de DNA/RNA a partir de amostras fecais suínas, adequado para utilização em campo.
• Validar clinicamente  o  biossensor  com  amostras  reais  de  leitões,  garantindo  elevados  níveis  de sensibilidade, especificidade e fiabilidade diagnóstica.
• Contribuir para a redução do uso desnecessário de antibióticos, promovendo intervenções terapêuticas direcionadas e alinhadas com as políticas europeias de saúde animal.

Com a implementação do SwineDx, espera-se alcançar:

• Um biossensor portátil capaz de fornecer resultados em menos de 30 minutos, a temperaturas moderadas (37–42oC).
• Diferenciação clara entre infeções bacterianas (ETEC) e virais (Rotavírus A) diretamente em campo.
• Redução do tempo de decisão clínica e melhoria na escolha terapêutica.
• Contributo direto para a diminuição do uso indiscriminado de antimicrobianos.
• Reforço da vigilância epidemiológica da DPD em explorações suinícolas.
• Maior sustentabilidade, resiliência e competitividade da suinicultura europeia.
• Potencial impacto nas políticas europeias de saúde animal, ao evidenciar a importância de patógenos ainda subvalorizados nos quadros regulamentares.

O SwineDx representa um passo inovador na próxima geração de diagnósticos veterinários, aproximando a biotecnologia molecular das necessidades reais do terreno e promovendo uma produção animal mais responsável e segura.