ColorISH - Development of a new colorimetric method for the detection of Legionella spp. in water sources

Objetivos e Atividades

O objetivo deste projeto é o desenvolvimento de um novo método ISH baseado em mímicos de ácidos nucleicos (NAMs) para a detecção rápida (3h) de densidades celulares de Legionella em amostras de água. Este projeto pretende servir de base para o desenvolvimento futuro de um método point-of-use com potencial de uso na monitorização de amostras de água in loco, usando equipamento de detecção simples e portátil (por exemplo, espectrofotometro). O plano de trabalho deve ser desenvolvido conforme descrito abaixo:
Tarefa 1 - Desenho e otimização de sondas NAM para a detecção de Legionella spp.
Tarefa 2 - Desenvolvimento do método de hibridação colorimétrica in situ usando o complexo HRP-S
Tarefa 3 - Otimização do método pela triagem / seleção de conjugados enzima-NAM alternativos
Tarefa 4 - Validação do método desenvolvido em amostras reais de água e comparação com os métodos de cultura padrão

Resultados Esperados/Atingidos

• Contratação de Bolseiro Mestre - auxiliar no trabalho de laboratório (set/2019 a mai/2020).
• Desenho in silico de sondas NAM específicas para a detecção de Legionella (em execução).
• Subsequentemente, será avaliada a sua especificidade e sensibilidade em laboratório para selecionar a que tem melhor performance (trabalho futuro).
• Desenvolvimento do método usando uma sequência universal e (PNA e LNA) e usando um microorganismo surrogate (E. coli) mais inócuo, permitindo o desenvolvimento do método enquanto as sondas de Legionella estão a ser avaliadas (em execução).
• Melhoria do método testando não apenas o complexo HRP-STP, mas também outras peroxidases mais curtas, a fim de melhorar a internalização de moléculas pelas bactérias para melhor ocorrer a hibridação (trabalho futuro).
• Adaptação do método à detecção de Legionella usando a sonda NAM específica selecionada (trabalho futuro).
• Validação de método (trabalho futuro).