VitiRoots: o papel dos miRNAs na resposta à seca de porta-enxertos de Vitis

Objetivos, atividades e resultados esperados:

O principal objetivo deste projeto é identificar as condicionantes fisiológicas e moleculares que determinam a resposta de porta-enxertos de videira a condições de falta de água.Entre os vários objetivos específicos do projeto estão, para além da divulgação de conhecimento, através da publicação de artigos em revistas científicas nacionais e internacionais e da participação em reuniões científicas, o estabelecimento de parcerias que permitam a disseminação dos resultados junto do setor produtivo.

A tarefa 1 inclui a preparação de material vegetal e a configuração do ensaio experimental. A caracterização completa da ecofisiologia das plantas sob stress hídrico é crucial para o acesso ao efeito diferencial entre os porta-enxertos estudados.

Na tarefa 2, as determinações serão realizadas ao longo dos ensaios: troca de gás das folhas e análise da temperatura juntamente com a avaliação do estado hídrico do porta-enxerto e medidas do sistema hidráulico radicular. Os dados fisiológicos serão integrados com os dados moleculares obtidos no âmbito das tarefas seguintes.

Na tarefa 3, o RNA total será extraído das raízes em 3 pontos temporais chave: i) controlo; ii) stress moderado e iii) stress severo. Um total de 54 amostras (3 porta-enxertos x 2 regimes de água x 3 pontos temporais x 3 repetições) serão usadas para produzir as bibliotecas de miRNAs e sequenciadas numa plataforma Illumina. Os dados brutos obtidos para cada amostra através do processo de sequenciação de alto rendimento de miRNA serão analisados posteriormente. A identificação de miRNAs conservados e novos beneficiará não só dos dados da miRBase (http://www.mirbase.org/) como também do genoma de Vitis (http://genomes.cribi.unipd.it/grape/ ).

Na tarefa 4, será feita a previsão de alvos e as atribuições funcionais de potenciais genes alvo. 

Na tarefa 5, o padrão de expressão dos miRNAs identificados e dos genes alvo será avaliado em mais detalhes: a PCR quantitativa em tempo real dos miRNAs e alvos selecionados será estendida a outros pontos de tempo dos ensaios de stress.

Os resultados obtidos serão compartilhados com todos os grupos colaboradores e, sempre que necessário, serão disponibilizados para outros grupos que trabalham neste campo. Todos os resultados serão difundidos para a comunidade científica, principalmente através de publicações científicas internacionais, teses de mestrado e comunicações em conferências nacionais e internacionais. A acessibilidade para fins mais aplicados (por exemplo, reprodução) será garantida por contatos próximos e regulares com viveiristas e produtores.